Преаналитический этап

При исследовании на инфекционные маркеры необходимо соблюдать все правила преаналитического этапа, который включает в себя комплекс мероприятий, выполняемых от назначения на инфекционные маркеры до осуществления лабораторных измерений взятого биоматериала.

Преаналитический этап-это условия, в которых находится пациент перед взятием у него биоматериала, его первичной обработки, хранения и доставки в лабораторию. Соблюдение правильного проведения преаналитического этапа важно, так как  до 60% погрешностей в КДЛ по России приходится на преаналитический этап.

Преаналитический этап включает: правильное взятие биоматериала, хранение, транспортировка.

;Образец крови для теста на ВИЧ должен забирать квалифицированный сотрудник с применением во всех случаях «универсальных мер предосторожности» против случайной передачи вируса.

При исследовании аналитов в цельной крови, сыворотке или плазме образец крови берут чаще всего из локтевой вены. При плановом назначении лабораторного теста с исследованием крови  материал для его выполнения следует брать натощак (после примерно 12ч. голодания и воздержания от приема алкоголя и курения), сразу после пробуждения обследуемого (между 7-ю и 9-ю часами утра),  при минимальной физической активности непосредственно перед взятием (в течение 20-30 мин), в положение пациента лежа или сидя.

Рационально применение пробирок для взятия крови небольшого объема (10мл.) при соотношении диаметра и высоты пробирки 16,8 на 95 мм.

Взятие венозной крови облегчается применением вакуумных пробирок. Под влиянием вакуума кровь из вены быстро поступает в пробирку, что упрощает процедуру взятия и сокращает время наложения жгута. В зависимости от назначенного вида исследования образец крови должен собираться при наличии строго определённых добавок. Для получения плазмы кровь собирают с добавлением антикоагулянтов: этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА), цитрата, оксалата, гепарина. Для исследований системы свертывания крови применяется только цитратная  плазма. В большинстве гематологических исследований используют венозную кровь с солями этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА, К2 или К3-ЭДТА). Взятие биоматериала для иммуносупрессантов (такролимус и циклоспорин)  проводят в пробирке с ЭДТА, К2 до верхней метки, содержимое пробирки незамедлительно, с осторожным переворачиванием 5-10 раз, перемешать.

Направления на исследование в иммуноферментном анализе образца крови на ВИЧ-инфекцию заполняется всеми ЛПУ независимо от организационно-правовой формы и формы собственности (приложение №1).

Дотестовое консультирование предполагает разъяснение в доверительной форме сути теста и болезни и ответы на все вопросы до того, как будет проведен тест. При проведении добровольного тестирования на ВИЧ инфекцию пациент обязательно подписывает информированное согласие на данное тестирование.

При тестировании населения на ВИЧ инфекцию необходимо строго соблюдать правила заполнения сопроводительных документов.

При конфиденциальном тестировании персональные данные на пациента приводятся без сокращений (по паспорту или заменяющему его документу, удостоверяющему личность обследуемого): полные Ф.И.О. ,полная  дата рождения, гражданство, адрес места жительство, код контингента (приложение №2).

При анонимном тестировании (без паспорта) указывается только цифровой код, включающий порядковый номер освидетельствуемого, год рождения, место жительства. Фамилия, имя, отчество освидетельствуемого не указывается.

Для предупреждения контаминации (механический перенос инфекционного агента из одного образца в другой) необходимо строго соблюдать правила забора биоматериала  и его транспортировки.

Доставка в лабораторию материала для исследования осуществляется в контейнерах, биксах или сумках-холодильниках. Доставляемые емкости с жидкими материалами должны быть закрыты пробками, исключающими выливание содержимого во время транспортировки. Дно контейнеров содержащих емкости с ПБА (микроорганизмы 3,4 групп патогенности), должно быть покрыто адсорбирующим материалом, контейнера, биксы или сумки-холодильники должны быть промаркированы и иметь международный знак «Биологическая опасность».

Доставка образцов крови происходит с соблюдением всех этапов холодовой цепи. Холодовая цепь – это соблюдение температурного режима от момента взятия биоматериала до лабораторного тестирования.

Транспортировка в лабораторию пробирок с образцами осуществляется в специальных контейнерах при температуре от +17c до +24c при условии недопущения прямого воздействия света и встряхивания.

Прием и разборка доставленного материала (проб) должны проводиться с соблюдением мер предосторожности. Емкости с ПБА должны помещаться на поднос или лоток, покрытый многослойной марлевой салфеткой, смоченной дезинфицирующим раствором. Персонал должен использовать маску и резиновые перчатки.  

Пробирки с образцами крови после оседания эритроцитов или оседания сгустка крови (не ранее чем через 30мин.  после взятия крови) подвергаются центрифугированию. При необходимости более длительного транспортирования в лабораторию образцы свернувшейся крови, предназначенные для получения сыворотки, должны быть отцентрифугированы  на месте не позднее, чем через 1ч после взятия образца. Кровь для получения сыворотки или плазмы центрифугируют в течение 10-15 мин при  800-1600 х g .

Забор крови при ПЦР исследовании, как правило, проводят с использованием антикоагулянтов (веществ, препятствующих свертыванию крови).  Важно помнить, что некоторые антикоагулянты являются эффективными ингибиторами ПЦР и их использование крайне нежелательно (например, гепарин). Другим неприятным ингибитором ПЦР является гемоглобин цельной крови (гемолиз).

При ПЦР исследовании кровь с ЭДТА может храниться  при  температуре +2+30 c до 72 часов со времени сбора, после этого может храниться ещё два дня при +2+8 c. Для хранения более пяти дней отделить плазму от красных клеток крови центрифугированием при  800-1600 х g в течение 20минут. После отделения плазмы она может храниться при +2+8º ещё семь дней. Также плазма может храниться при -20C длительное время.

Несоблюдение правил преаналитического этапа приводит к возникновению неспецифических реакций.

Критерии для отказа в принятии лабораторией биоматериала на исследования:

• расхождение между данными заявки и этикетки;
• отсутствие этикетки на емкости для взятия пробы;
• невозможность прочесть на заявке или этикетке паспортные данные пациента;
• отсутствие названия отделения, номер истории болезни, фамилии лечащего врача, подписи процедурной сестры, точного перечня необходимых исследований;
• гемолиз эритроцитов (выход в жидкую часть плазмы различных внутриклеточных компонентов);
• липемия - мутная плазма или сыворотка, обусловливается  высоким содержанием в них хиломикронов;
• взятый материал находится в несоответствующей емкости;
• наличие сгустков в пробах с антикоагулянтом ( определение концентрации иммуносупрессантов такролимуса и циклоспорина) ;
• материал взят в вакуумные емкости с просроченным сроком годности.

Общие правила по подготовке к исследованиям на ВИЧ-инфекцию, вирусный гепатит В (HbSAg), вирусный гепатит С, сифилис.

1. кровь сдавать утром натощак;
2. исключить физические нагрузки в течение 24 часов;
3. накануне избегать пищевых нагрузок;
4. исключить курение минимум за 2 часа до исследования;
5. исключить приём алкоголя накануне исследования;
6. при себе иметь паспорт или заменяющий его документ с фотографией.

Забор крови проводится с 8-00 до 15-00 ч., в субботу с 8-00 до 11-00  по адресу: г. Оренбург, ГБУЗ «ООКСПК»  ул. Аксакова 32 ежедневно, кроме воскресенья.

Результат выдается на следующей день, после сдачи крови в ГБУЗ «ООКСПК».

Выдача результата с 16-00 -17-00ч. При себе иметь паспорт.

Внимание! При положительных и сомнительных реакциях, срок выдачи результата может быть увеличен до 14 дней для ВИЧ инфекции и до 7 дней для вирусного гепатита В, вирусного гепатита С и  сифилиса.